摘要：本發(fā)明提供了一種用T7噬菌體RNA聚合酶和T7啟動子系統(tǒng)在哺乳動物細(xì)胞表達(dá)蛋白的方法，所述方法包括如下步驟：(1)根據(jù)哺乳動物細(xì)胞偏愛密碼子優(yōu)化原始T7RNA聚合酶基因序列，在所述基因序列上、下游分別加入酶切位點(diǎn)，并在下游添加SV40T?Antigen核定位序列；基因合成的T7RNA聚合酶基因序列如SEQ?ID?NO:1所示；(2)將所述合成的T7RNA聚合酶基因克隆到質(zhì)粒pUC57中，通過酶切位點(diǎn)連接到pcDNA3.1真核表達(dá)載體上，構(gòu)建得到pcDNA3.1?RNAP質(zhì)粒；(3)將待表達(dá)基因兩端分別加入T7啟動子，IRES和T7終止子，然后連接到pUC57載體上，構(gòu)建得到待表達(dá)基因的質(zhì)粒；(4)將步驟(2)和(3)中得到的質(zhì)粒作為雙質(zhì)粒共表達(dá)系統(tǒng)，以共轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，以及表達(dá)蛋白。本發(fā)明提高了哺乳表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量。
- 專利類型發(fā)明專利
- 申請人武漢華美生物工程有限公司;
- 發(fā)明人沈鶴霄;華權(quán)高;馬峰;
- 地址430206 湖北省武漢市東湖開發(fā)區(qū)高新大道818號醫(yī)療器械園B11棟
- 申請?zhí)?/b>CN201610788821.5
- 申請時間2016年08月31日
- 申請公布號CN106381310A
- 申請公布時間2017年02月08日
- 分類號C12N15/85(2006.01)I;
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