脂肪組織單細(xì)胞解離酶MJ018專為人、小鼠、大鼠等動物脂肪組織單細(xì)胞懸液制備設(shè)計，通過多元復(fù)合酶的溫和酶解作用將脂肪組織解離成為單個細(xì)胞懸液，在高得率的同時能夠獲得高活性的單細(xì)胞，后續(xù)適用于單細(xì)胞測序、流式細(xì)胞分析、流式細(xì)胞分選、原代細(xì)胞培養(yǎng)、類器官3D培養(yǎng)等實驗。
優(yōu)勢特點：
1、一步即用型
本產(chǎn)品只需把配套的酶干粉溶解在溶解液里，一步操作即可進行后續(xù)實驗。無需像進口競品一樣，把三四種酶分別溶解在不同溶液里，再分別進行體積計算，后量取不同體積的酶混合在一起并混勻才能使用，本產(chǎn)品無需任何稱量、計算，避免多步驟操作和復(fù)雜的計算，減少出錯概率。
2、多元復(fù)合酶
本產(chǎn)品是自主研發(fā)生產(chǎn)的多元復(fù)合酶，根據(jù)不同組織的細(xì)胞間質(zhì)種類配備8種以上的復(fù)合酶，可以更好的消化解離細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，比單純使用進口膠原酶IV、DNA酶或進口競品的三四種混合酶的解離效率更高，解離時間短、細(xì)胞得率高、細(xì)胞活性強、抗原表位完整，自研自產(chǎn)成本更低，更有競爭力。
3、解離時間短
由于本產(chǎn)品使用的是8種以上自研自產(chǎn)的特異性組織解離酶，大多數(shù)qi官組織在10-15分鐘即可解離完全，解離時間超短，而單純使用進口膠原酶IV、DNA酶或進口競品的三四種混合酶需要1小時左右，甚至需要2-3小時才能解離完全。
4、細(xì)胞得率高
建立在多元復(fù)合酶的基礎(chǔ)上，該產(chǎn)品可以更好的消化細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，組織消化更徹底，組織單細(xì)胞完全釋放出來，組織團塊殘留少，因此細(xì)胞得率更高。
5、細(xì)胞活性強
針對不同的組織該產(chǎn)品配套了不同的特異性解離復(fù)合酶，該復(fù)合酶是溫和的解離方式，不像胰酶一樣對細(xì)胞有較大損傷，并且該復(fù)合酶酶解消化時間更短，大幅減少了細(xì)胞的離體時間，防止了解離酶的過度消化，因此能得到更高活率的單細(xì)胞?？乖砦桓暾募?xì)胞。
6、抗原表位完整
由于該產(chǎn)品酶解效率更高，酶解時間和細(xì)胞離體時間更短，組織細(xì)胞損傷更低，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性更好，細(xì)胞活性更強，因此抗原表位更完整，更有利于抗ti結(jié)合染色，解離的單細(xì)胞更適合進行流式分析分選實驗。
使用方法
1、溶解酶干粉
初次啟用試劑盒時執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液qiang取B瓶中的溶解液反復(fù)吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中，必要時可將qiang頭口用剪刀剪大，確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中；隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完全溶解，必要時可放置搖床上搖晃至完全溶解，完全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。
2、過濾分裝解離酶
在A瓶中酶干粉完全溶解在B瓶溶解液后，根據(jù)后續(xù)實驗如需要無菌解離組織，則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除jun后分裝。建議每5mL分裝一瓶，分裝至A瓶中，分裝后應(yīng)立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6個月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。
3、酶解實驗操作
(1)實驗準(zhǔn)備：預(yù)制碎冰，冰上解凍單細(xì)胞解離酶和酶解終止液，單細(xì)胞解離儀器開機預(yù)熱，PBS預(yù)冷，眼科剪、鑷子等無菌手術(shù)器械，40 μm無菌細(xì)胞篩，離心管、離心機等預(yù)冷。
(2)組織收集：無菌條件下收集組織，立即置于冷的PBS中，盡可能4h內(nèi)處理，如需放置更長時間，請使用高活性組織保存液（貨號MJ104）。
(3)清洗組織：將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì)，稱重記錄。
(4)剪碎組織：將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中，用鋒利眼科剪碎成1-2 mm3小塊，剪至泥糊狀，剪得越碎酶解就越充分，單細(xì)胞酶解時間就會越短；如有配備組織單細(xì)胞解離儀，覺得剪碎較麻煩也可不用嚴(yán)格剪碎，同樣能獲得較好的解離效果。
(5)酶解組織：組織剪碎后，取適量單細(xì)胞解離酶加入解離管中，上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。
?、偃缗鋫溆薪M織單細(xì)胞解離儀，可按照儀器操作規(guī)范進行單細(xì)胞解離。本產(chǎn)品適用市面上所有進口或國產(chǎn)品牌的組織單細(xì)胞解離儀，但需注意本產(chǎn)品解離效率比自備酶或其他競品的酶都高，解離時間可減少至少一半，需每隔5-10min確認(rèn)一下解離情況，不同組織解離完全的時間從5min到50min不等，在保證解離效果情況下盡可能減少酶解時間，酶解完全即可終止酶解；
?、谌缥磁鋫浣M織單細(xì)胞解離儀，也可進行手動解離。在剪碎組織步驟中需嚴(yán)格按照要求剪碎組織；根據(jù)組織和所加酶體積選擇在1.5mL EP管或5mL EP管中，將解離酶與組織充分混勻，用剪刀將1mL移液槍槍頭口稍微剪大后，用移液槍用力吹打混合物，如吹打堵塞槍頭說明組織剪碎不夠徹底，可繼續(xù)剪碎組織或?qū)岊^再剪大一些，保證能用移液槍反復(fù)吹打混合物，反復(fù)吹打十余次后立即放入37℃培養(yǎng)箱、水浴或金屬浴中孵育，有搖床效果更佳，每孵育5分鐘需進行一次反復(fù)吹打，直至組織團塊完全解離成單細(xì)胞懸液。
(6)單細(xì)胞過濾：待組織完全解離后，立即瞬離解離管3s，并將解離管插在冰上，用移液槍吸取上清通過40 μm的濾網(wǎng)進行過濾，過濾全程在冰上操作。
(7)終止酶解：取等量的酶解終止液（貨號MJ102）或完全培養(yǎng)基進行終止酶解。
(8)收集細(xì)胞：4℃、400g離心5分鐘后棄上清，用預(yù)冷的PBS清洗后再離心棄上清。
(9)紅細(xì)胞裂解：取適量紅細(xì)胞裂解液（貨號MJ103）重懸細(xì)胞沉淀，冰上孵育10分鐘，間歇吹打輕搖，4℃、300g離心5分鐘后棄上清。
(10)清洗：取預(yù)冷的PBS重懸，4℃、300g離心5分鐘后棄上清，重復(fù)清洗2次
(11)去除碎片：如碎片較多，可用高·效碎片去除劑（貨號MJ101）去除碎片。
(12)細(xì)胞活性檢測：臺盼藍(lán)或AOPI染色，活細(xì)胞率應(yīng)＞85%。
(13)細(xì)胞凍存：如單細(xì)胞解離后暫時無法進行后續(xù)實驗，可使用高·效高活細(xì)胞凍存液（貨號MJ105）將單細(xì)胞重懸后直接凍存于-80℃，可凍存數(shù)年。
實驗注意事項：
本產(chǎn)品單供科研使用；如下游實驗需無菌培養(yǎng)，全程需在超凈臺內(nèi)進行無菌操作，避免污染；酶解需在37℃，其他操作均在冰上操作，嚴(yán)格控制溫度；根據(jù)組織酶解量調(diào)整酶解時間，勤觀察及時確認(rèn)裂解階段，在保證裂解效果情況下盡可能減少酶解時間，以免時間過長造成對細(xì)胞的損傷；若用于單細(xì)胞測序等要求較高的單細(xì)胞制備，全程需加快速度，單細(xì)胞解離后需立即進入下游建庫步驟；該酶溶解后-20℃或-80℃保存，可保存6個月，單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。
