單細胞可視化分選系統(tǒng)——isoPick
isoPick是英國iotaSciences公司新推出的一款基于GRID技術（號：WO2019197373A1 ）、高通量、高自動化的單細胞可視化分選系統(tǒng)。isoPick采用微射流技術，利用界面張力對細胞培養(yǎng)基（或干細胞涂層）進行重塑，在培養(yǎng)皿上雕刻出單獨的細胞腔室GRID。isoPick可以在 6 厘米培養(yǎng)皿上創(chuàng)建 256 個單細胞腔室GRID陣列，并將細胞以納升體積全自動地分配到各個 GRID 單細胞腔室中，通過isoPick的光學顯微鏡可以清楚地看到 GRID 室中的單細胞。基于GRID技術和光學成像信息，isoPick可以確保分選出的細胞為單細胞。
設備特點
- 全自動化流程
- 操作簡單，對細胞無損傷
- 結(jié)果可追蹤
- 直接轉(zhuǎn)移到PCR管或96孔板
- 結(jié)構(gòu)緊湊，體積小
傳統(tǒng)單細胞分離手段無法保證所得的樣品內(nèi)只有一個單細胞，有可能有多個細胞或細胞團，導致下游的實驗出現(xiàn)誤差。isoPick采用的GRID技術結(jié)合圖像信息分析，結(jié)果可追蹤，保證準確的單細胞分選。而且isoPick分選條件溫和，可以顯著提高分選單細胞的存活率。同時isoPick可將單細胞樣品按照特定的體積直接轉(zhuǎn)移到96孔板或PCR管中，無縫銜接單細胞下游應用，確保后續(xù)單細胞組學信息完整性。
應用領域
部分用戶單位
部分應用案例
人類誘導多能干細胞(hiPSCs)的單細胞克隆
人類誘導多能干細胞(hiPSCs)構(gòu)建單克隆細胞系培養(yǎng)步驟繁瑣，細胞對異常的處理和操作非常敏感，傳統(tǒng)單細胞分選容易導致細胞和遺傳毒性應激的積累，進而導致不良分化和多能性喪失。
使用isoPick可以溫和、自動地將人類誘導多能干細胞(hiPSCs)進行單細胞分選，以培養(yǎng)hiPSCs單克隆細胞系，顯著提高了細胞分離與克隆效率。
K562細胞單細胞測序
傳統(tǒng)單細胞測序需對單細胞進行全基因組擴增（WGA），但傳統(tǒng)單細胞WGA受限于如何獲得單個細胞并轉(zhuǎn)移到小體積的WGA反應中。
使用isoPick自動將K562細胞拾取并轉(zhuǎn)移至含3.5 µl scWGA試劑的PCR管中，并無縫銜接scWGA反應。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示（下圖），單細胞WGA的DNA樣本(+)中兩種基因均被特異性擴增，而陰性對照(-)沒有這兩種擴增產(chǎn)物，符合預期。
對人類誘導多能干細胞 (hiPSCs) Prime 編輯構(gòu)建工程細胞系
Prime 編輯可在 HEK3 基因座中精確插入三個核苷酸，用于構(gòu)建工程細胞系hiPSCs。通過引入靶標特異性 pegRNA 來編輯單個或多個基因組位點，以進行精確有效的基因組編輯，促進疾病建模和功能遺傳學研究。
Prime 編輯使用與逆轉(zhuǎn)錄酶融合的 Cas9 切口酶，將 DNA 序列從“Prime 編輯”引導 RNA (pegRNA) 復制到特定基因座。通過Prime 編輯將多西環(huán)素誘導型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 細胞系的AAVS1 基因組，之后使用isoPick分選轉(zhuǎn)入靶基因的hiPSCs細胞系，以確保細胞的單克隆性。（見上圖）
該研究使用isoPick來確保工程細胞系的單克隆性與準確性。
參考文獻：Bharucha N, Ataam J A, Gavidia A A, et al. Generation of AAVS1 integrated doxycycline-inducible CRISPR-Prime Editor human induced pluripotent stem cell line[J]. Stem Cell Research, 2021, 57: 102610.
膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）通過表觀遺傳免疫編輯獲得骨髓相關轉(zhuǎn)錄程序以引發(fā)免疫逃逸
研究人員通過將多形性膠質(zhì)母細胞瘤干細胞 (GSC) 連續(xù)移植到免疫活性宿主中，發(fā)現(xiàn) GSC 通過建立增強的免疫抑制腫瘤微環(huán)境來免疫逃逸。從機制上講，GSC通過表觀遺傳免疫編輯過程引起，其在免疫攻擊后強制執(zhí)行 GSC 中穩(wěn)定的轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳變化。研究中使用Irf8敲除細胞系實驗證明，Irf8的是細胞免疫逃逸的一個重要因素，且在體內(nèi)可能通過IFNγ介導的發(fā)生。該研究使用isoPick構(gòu)建Irf8克隆敲除系。
參考文獻：Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell。
