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PrimerPlex是一種且復(fù)雜的工具,用于設(shè)計(jì)多重PCR的引物。多重分析有助于在單個反應(yīng)容器中擴(kuò)增多個目標(biāo),從而減少試驗(yàn)時(shí)間和成本。
用于多重PCR和高通量SNP基因分型和分析的寡核苷酸設(shè)計(jì)
多重PCR的引物設(shè)計(jì)存在若干挑戰(zhàn),包括引物二聚體、無法分離具有相似電泳遷移率的擴(kuò)增子以及因與非目標(biāo)DNA模板的非特異性結(jié)合而導(dǎo)致的錯誤引物。PrimerPlex采用專有算法,在統(tǒng)一的反應(yīng)條件下為100多個序列設(shè)計(jì)理想的多重引物組。引物組是在篩選了池中的全部引物并盡量減少Tm錯配后確定的,以確保特定的擴(kuò)增和高信號強(qiáng)度。在這個過程中,它在幾秒鐘內(nèi)分析了數(shù)百萬個可能的多重引物集,并提出了一個備用集的清單。你可以指定所設(shè)計(jì)的引物對之間的minimum產(chǎn)物大小差異,以便在凝膠上更好地顯示條帶。為了保證引物的特異性,引物可以從PrimerPlex與NCBI的任意基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST搜索。
對于SNP基因分型研究,PrimerPlex設(shè)計(jì)了SNP側(cè)翼引物。結(jié)果包括每個DNA模板的引物對,包括產(chǎn)物大小、退火溫度和其他物理化學(xué)寡核苷酸特性。二級結(jié)構(gòu)的圖形顯示也可以幫助確定它們是否會阻礙反應(yīng)。
多重PCR檢測用于基因表達(dá)分析(使用凝膠電泳的終點(diǎn)檢測)、高通量SNP應(yīng)用(例如基因分型)、下一代測序所需的目標(biāo)富集、病原體檢測、菌株分型和單倍體分型。PrimerPlex還為高通量SNP基因分型分析設(shè)計(jì)了理想等位基因特異性捕獲探針和等位基因特異性引物延伸 (ASPE) 引物。
PrimerPlex特征:
多重SNP檢測和高通量基因分型
使用PrimerPlex,您可以設(shè)計(jì)SNP側(cè)翼的多重PCR引物、3' 端具有SNP的ASPE引物以及捕獲中心具有SNP的探針。PrimerPlex使您能夠通過為每個突變設(shè)計(jì)寡核苷酸來檢測中等大小基因組序列的全部突變。檢查這些引物和探針的多重性,并顯示可能的理想集合。
多重PCR引物設(shè)計(jì)
設(shè)計(jì)適用于多重檢測的引物組可能是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。PrimerPlex使用專有算法來設(shè)計(jì)多重引物組,很大限度地減少 Tm錯配。分析全部組的交叉反應(yīng)性以確保特異性和有效擴(kuò)增。您可以從以各種可排序順序呈現(xiàn)的替代列表中選擇適合您的實(shí)驗(yàn)需求的集合。使用PrimerPlex,您可以靈活地設(shè)計(jì)引物的3'末端、5'末端、距這些末端的指定距離或序列內(nèi)的任意位置。
對于SNP基因分型分析,該程序設(shè)計(jì)側(cè)翼突變的引物,例如SNP、DIP(缺失/插入多態(tài)性)和MNP(多核苷酸多態(tài)性)。
檢測支持
使用PrimerPlex,設(shè)計(jì)用于多重PCR、ASPE和直接雜交檢測的寡核苷酸。篩選寡核苷酸的交叉反應(yīng)性,以確保高信號強(qiáng)度。很大限度的減少Tm錯配。篩選寡核苷酸的二聚體、運(yùn)行和重復(fù)。
下一代測序分析
使用PrimePlex,設(shè)計(jì)用于預(yù)測序樣品制備和突變檢測的多重寡核苷酸,例如SNP、DIP(刪除/插入多態(tài)性)和MNP(多核苷酸多態(tài)性)就像單擊幾個按鈕一樣簡單。
引物特異性
程序BLAST在一次搜索運(yùn)行中搜索多個序列。在引物設(shè)計(jì)期間會自動解釋結(jié)果并避免識別出的同源性,從而確保設(shè)計(jì)具有高度特異性。
評估預(yù)先設(shè)計(jì)的引物和探針
PrimerPlex可以使用預(yù)先設(shè)計(jì)好的經(jīng)過驗(yàn)證的寡核苷酸來構(gòu)建多重集。在為每個序列指定寡核苷酸后,分析它們的特性,并提醒用戶發(fā)現(xiàn)任意偏差。對于預(yù)先設(shè)計(jì)的寡核苷酸不可用的序列,PrimerPlex對其進(jìn)行設(shè)計(jì),檢查它們的多路復(fù)用并突出顯示兼容性問題(如果有)。然后,用戶可以決定接受該設(shè)計(jì)或創(chuàng)建一個單獨(dú)的池。此功能將控制權(quán)交給用戶。
添加MagPlex TAG
該程序現(xiàn)在還支持MagPlex TAGs數(shù)據(jù)庫以及MicroPlex xTAGs(以前稱為FlexMAP TAGs),以便為每個ASPE引物自動添加適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽。這些標(biāo)簽的選擇使得它們可以很大限度的減少二聚化。并且不會在它們所連接的寡核苷酸上折疊起來。此外,用戶可以覆蓋程序的推薦并自行選擇標(biāo)簽。如果標(biāo)簽不是unique或者選擇的標(biāo)簽與寡核苷酸不兼容,PrimerPlex會提醒用戶。
系統(tǒng)要求:
| 對于Windows | 需要 | 推薦 |
| CPU | Pentium IV 1.80 GHz | Intel Core i3 (3rdGen) |
| 內(nèi)存 | 1GB可用RAM | 2GB或更高的可用RAM |
| 硬盤空間 | 500MB可用硬盤 | 1GB可用硬盤 |
| 屏幕分辨率 | 800×600 | 1024×768 |
Windows支持的平臺:XP/Vista/Windows 7/Windows 8/Windows 10