全自動(dòng)病毒熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)
美國NanoView公司所開發(fā)的全自動(dòng)病毒熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)是一款無需純化的、全自動(dòng)的可對(duì)病毒進(jìn)行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供的病毒表征信息，包括病毒粒徑、病毒表面和內(nèi)部病毒蛋白、病毒物理滴度、空載比檢測(cè)、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及假型定量表征等。操作簡單，結(jié)果可靠。
全自動(dòng)病毒熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術(shù)，允許研究者直接分析特定群體的病毒。通過配套的試劑盒，客戶一次性能夠分析多達(dá)16個(gè)不同的樣本，大大節(jié)省了時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本。
ExoView? 參數(shù)信息：
- 顆粒大小分辨范圍：20nm
- 低檢測(cè)濃度為106VP/mL
- 所需樣本體積：35 μL
- 激發(fā)波長：410 nm，488 nm，555 nm，640 nm，750nm
- 可一次檢測(cè)16個(gè)樣本，每個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)6個(gè)不同亞型及4種生物標(biāo)記的熒光定位
- 捕獲抗體：一個(gè)芯片多允許6種捕獲抗體（+陰性對(duì)照）
- 熒光通道：4個(gè)熒光通道
ExoView Kit 配置清單:
LentiView Kit | VSV-G 捕獲抗體 陰性對(duì)照 VSV-G、p24兩色共標(biāo)記熒光抗體。 |
ViroFlex Kit | VSV-G 捕獲抗體 自由捕獲抗體1 自由捕獲抗體2 陰性對(duì)照 VSV-G、p24兩色共標(biāo)記熒光抗體。 |
ExoView 主要特征：
無需純化
NanoView的LentiView?技術(shù)可以對(duì)慢病毒進(jìn)行檢測(cè)，將蛋白質(zhì)組信息與物理病毒滴度結(jié)合起來，無需樣品純化。只需 35 μl 未純化或純化的樣品，檢測(cè)濃度低至106VP/ml。無需擔(dān)心純化帶來的誤差，更地測(cè)量樣品。
慢病毒示意圖
的病毒粒徑分析
全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)能夠?qū)?gt;20 nm的病毒進(jìn)行全方面的表征，無論是粒徑分布、空載病毒與完整病毒的假型分析均可在一次測(cè)試中得到。并且所用來測(cè)試的樣本無需進(jìn)行純化，避免因純化帶來的樣本偏差。
完整/空載病毒的粒徑分布。完整病毒的粒徑比空載病毒高約13 nm(峰值分別是94 nm和81 nm)
病毒滴度
病毒物理滴度的常用檢測(cè)方法是p24 ELISA。該方法測(cè)量p24衣殼蛋白的濃度并將其轉(zhuǎn)化為病毒物理滴度。樣品中溶解的p24、不同病毒p24含量的不同以及病毒聚集會(huì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。此外， p24 ELISA無法檢測(cè)缺少衣殼(空載)的顆粒。LentiView?可對(duì)樣品中病毒進(jìn)行高靈敏度的定量檢測(cè)，獲得滴度數(shù)據(jù)，區(qū)分完整和空載病毒并識(shí)別樣品中雜質(zhì)如可能經(jīng)過純化帶有的外泌體等。
紅色熒光抗體標(biāo)記病毒的內(nèi)部p24衣殼蛋白，用藍(lán)色熒光抗體標(biāo)記VSV-G，同時(shí)表達(dá)p24和VSV-G的病毒顯示粉紅色，并由 NanoView專用軟件計(jì)數(shù)。
完整/空載病毒顆粒的比例
NanoView的LentiView?技術(shù)可以簡單快速地分析出完整/空載病毒顆粒的比例，區(qū)分完整(成功轉(zhuǎn)導(dǎo))和空載病毒并識(shí)別樣品中雜質(zhì)，而完整/空載病毒顆粒的比例是確定轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的主要依據(jù)。
完整病毒是表達(dá)VSV-G和/或ETL，且表達(dá)衣殼蛋白p24的病毒顆粒，空載病毒是表達(dá)VSV-G和/或ETL，未表達(dá)衣殼蛋白p24的病毒顆粒
LentiView?芯片表面固定的抗VSV-G抗體捕獲病毒后，即可檢測(cè)表面和內(nèi)部蛋白標(biāo)記物。在LentiView?獲得熒光圖像中，綠色熒光點(diǎn)代表沒有衣殼的VSV-G+病毒顆粒，黃色熒光點(diǎn)代表含有衣殼的完整病毒顆粒。
病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率
我們使用LentiView?對(duì)三種不同的慢病毒樣品進(jìn)行了表征，檢測(cè)病毒顆粒亞群，進(jìn)而研究這些載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。三種不同的慢病毒樣品分別為野生型慢病毒 (VSV wt)、含高濃度質(zhì)粒的工程化靶向配體 (ETL-HC)、含低濃度質(zhì)粒的工程化靶向配體 (ETL-LC)。
三種慢病毒載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率
轉(zhuǎn)導(dǎo)效率與物理滴度的對(duì)比
根據(jù)病毒碎片粒徑和病毒粒徑的差別，對(duì)每一種載體中的病毒和病毒碎片數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。50nm以上的病毒與50nm以下的病毒碎片的比例和載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性。
載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和病毒與病毒碎片比例的對(duì)比
完全定制化
客戶通過ViroFlex技術(shù)使用連接蛋白連接任意定制化的捕獲抗體，并結(jié)合到ViroFlex芯片表面進(jìn)而捕獲所需的病毒，在自己的實(shí)驗(yàn)室里輕松進(jìn)行高度定制化的檢測(cè)。
ViroFlex的芯片捕獲抗體排布示意圖
ViroFlex定制化檢測(cè)原理：
- 先將連接蛋白與所需的定制抗體連接
- 再將連接抗體的連接蛋白與ViroFlex芯片表面的連接蛋白抗體連接
- 所需的定制抗體從而結(jié)合到了芯片上
- 將樣品在芯片上孵育，定制抗體即可特異性捕獲病毒
- 每個(gè)芯片多可結(jié)合兩種定制化捕獲抗體
ViroFlex芯片的捕獲原理(左)與普通芯片的捕獲原理(右)示意圖
