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實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

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德國 Nanoanalytics

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope


實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

德國 NanoAnalytics公司推出的細胞跨膜電阻儀(即實時無標記細胞動態(tài)分析儀)——cellZscope是由電腦控制,全自動、長時間實時監(jiān)測細胞層生理學參數(shù)的儀器,可實時輸出跨膜電阻(TEER)重要指標,一次監(jiān)測樣品6/24/48/72/96個。尤其適用于細胞屏障(消化道、呼吸道、血腦屏障)特性,藥物轉(zhuǎn)運,納米藥物研發(fā),中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,腫瘤等領域的研究。


設備特點

  ☆  不干擾細胞正常生長環(huán)境---測量的數(shù)值更加真實

  ☆  超長時間全自動實時分析---測量的數(shù)據(jù)更加完整

  ☆  測量采用更寬的頻率范圍---擬合的數(shù)據(jù)更加

  ☆  構建的數(shù)理模型更加細致---電生理參數(shù)更加豐富

  ☆  可兼容多種類型培養(yǎng)插件---耗材選擇更加多樣化


技術原理

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

  表皮或內(nèi)皮細胞之間通過緊密連接形成一層具選擇性的細胞屏障,細胞屏障不僅控制鄰近細胞間間隙對各種溶解物的擴散滲透率,而且調(diào)控跨細胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運。細胞屏障的存在一方面保護了機體免受有害物質(zhì)的傷害,另一方面也限制了治療性藥物的進入。

  細胞屏障的通透性可以通過跨膜電阻(即TEER,Transepithelial resistance)來反映,細胞屏障的通透性與跨膜電阻TEER之間的關系為:通透性越高TEER越低,反之亦然。


基本參數(shù) 

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

  ☆  可以直接讀取細胞屏障層的電阻值TEER (Ω.cm2);

  ☆  完全兼容常用廠家的Transwell細胞培養(yǎng)皿。包括BD,Biosciences,Corning,Bio-One,Millipore等。無儀器自帶耗材和其他額外耗材;

  ☆  細胞模塊可以同時容納6/24/48/72/96個培養(yǎng)皿。每個培養(yǎng)皿都有三種型號可選:小孔型(“24孔”型Transwell培養(yǎng)皿),中孔型(“12孔”型Transwell培養(yǎng)皿),大孔型(“6孔”型Transwell培養(yǎng)皿);

  ☆  cellZscope細胞模塊是放置于標準的細胞培養(yǎng)箱中,實時動態(tài)監(jiān)測,可以監(jiān)測數(shù)秒到數(shù)周的細胞動態(tài)生物學行為變化。


應用領域

  ☆  細胞屏障(血腦屏障、鼻黏膜及消化道屏障等)的特性

  ☆  上皮細胞、內(nèi)皮細胞、貼壁細胞等的跨膜電阻測量

  ☆  緊密連接動力學

  ☆  新型藥物研發(fā)

  ☆  藥物或毒物對細胞屏障功能的影響

  ☆  腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移

  ☆  免疫細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用


設備型號

4種不同型號可供選擇:cellZscopeE、cellZscope+、cellZscope2、cellZscope3

cellZscopeE

☆  入門的cellZscopeE型號更靈活,如果您沒有較高的通量檢測,可以選擇cellZscopeE

☆  多達6個通道的TER檢測

☆  細胞培養(yǎng)環(huán)境下實時長時間檢測

☆  可以兼容多種transwell小室

 ☆  操作簡單,清洗方便。

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

cellZscope+

☆  cellZscope+ 型號是德國nanoanalytics公司多年自動化細胞監(jiān)控設備開發(fā)經(jīng)驗的成果集中體現(xiàn)

☆  全面和準確的阻抗結果讀取,全頻譜信息

☆  的靈活性,不同孔徑的細胞培養(yǎng)條件可供選擇

☆  可持續(xù),易于使用和維護,不需特殊工具,細胞模塊上、下部分均可滅菌

☆  cellZscope+型號設計保證了簡單的操作和的靈活性。細胞模塊為研究人員提供了監(jiān)測所有孔的完整的頂部和基底外側(cè)信息

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

cellZscope2

☆  cellZscope2的型號為基于阻抗的細胞監(jiān)測提供了一些全新的體驗

☆  在時間分辨率達到了新的性能基準。多通道數(shù)據(jù)采集使cellZscope2提供了快、全面的阻抗輸出

☆  特殊的易用性,更換培養(yǎng)基等細胞培養(yǎng)常規(guī)操作,無需插拔數(shù)據(jù)線,數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更高

☆  cellZscope2更快的性能允許更高的吞吐量。在實驗前,實驗中和實驗后,方便細胞模塊與控制模塊的數(shù)據(jù)對接

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

cellZscope3

☆  四個細胞模塊,每個有24個孔,可以連接到一個cellZscope3控制器,同時測量96個孔

☆  自動化的,快速的全程監(jiān)控,獲得數(shù)天或數(shù)周的長期監(jiān)測數(shù)據(jù)

☆  特殊的易用性,更換培養(yǎng)基等細胞培養(yǎng)常規(guī)操作,無需插拔數(shù)據(jù)線,數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更高

☆  時間分辨率高:cellZscope3每30秒完成單個細胞模塊即24孔的檢測

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope


四種型號詳細比較



cellZscopeE

cellZscope+

cellZscope2

cellZscope3

支持transwell小室尺寸

6-/12-/24-well

6-/12-/24-well

6-/12-/24-well

6-/12-/24-well

不同transwell小室尺寸組合

與標準transwell小室兼容性

細胞模塊部件可滅菌

測量速度

6孔全部完成約1min

24孔全部完成約4min

24孔全部完成約1..2min

每24孔全部完成約30s

細胞模塊底座

可讀取參數(shù)

TER/ Rmed

TER/Ccl/Rmed/Rins/

Cins/CPE_A/CPE_n

TER/Ccl/Rmed/Rins/

Cins/CPE_A/CPE_n

TER/Ccl/Rmed/Rins/

Cins/CPE_A/CPE_n

細胞模塊well數(shù)

6

24

24

96

6-well size

12-well size

24-well size


應用案例

  ■  用跨膜電阻(TEER)值法檢測Caco-2細胞屏障的完整性應用案例 

  用跨膜電阻(TEER)值法檢測Caco-2細胞屏障的完整性。Caco-2細胞以5×103細胞/孔的密度接種于Transwell小室中。周每隔更換一次新鮮培養(yǎng)基,然后在接下來的兩周每天更換一次新鮮培養(yǎng)基。并使用NanoAnalytics公司 Cellzscope2軟件對所得實時數(shù)據(jù)進行分析。

  Caco-2細胞培養(yǎng)19天后,細胞跨膜電阻值≥500 Ω·cm2,細胞形成一個完整的單層屏障,完整性通過Lucifer Yellow滲透性測試得到進一步得到證實,進而單層細胞屏障可用于下一步的運輸實驗。SRL和SRL NCs的細胞毒性呈濃度依賴性(圖1B)。SRL和SRL-NCs的半數(shù)抑菌濃度分別為147.51μg/mL和165.41μg/mL。在50μg/mL的SRL和SRL-NCs作用72h后,細胞存活率保持在80%以上。這表明本研究中使用的SRL濃度不會引起顯著的細胞毒性。因此,藥物對細胞活力的影響可以忽略不計。

  轉(zhuǎn)運實驗采用完整緊密連接的腸上皮Caco-2細胞單層作為模型,SRL和SRL-NCs組的跨膜電阻(TEER)值(圖1D)在整個轉(zhuǎn)運過程中未顯示出任何顯著變化,表明在沒有緊密連接遭到破壞的情況下,Caco-2細胞單層的完整性得以維持。

  將含藥物HBSS緩沖液和空白HBSS緩沖液分別添加到模型頂層(AP)和基底外側(cè)(BL)側(cè),模擬藥物從GIT到血液的吸收和轉(zhuǎn)運途徑。也就是說,細胞層從GIT中運出藥物并將其輸送到血液/腸系膜淋巴。相反,當將藥物HBSS緩沖液添加到BL側(cè)和空白HBSS緩沖液添加到AP側(cè)時,模擬了動物血液進入腸腔的過程。計算出SRL-NCs的流出速率由于Papp、BL-AP/Papp、AP-BL與SRL顯著不同(圖1C)。原因可能是藥物被納米化后藥物變得更小,比表面積增加,因此跨單層的轉(zhuǎn)運顯著增強。另一種可能是細胞占據(jù)了整個SRL-NCs結構,因此與SRL組相比,通透性增強,SRL-NCs組AP→BL側(cè)Papp高5.6倍,外排率低。

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

圖1  SRL和SRL-NCs在Caco-2細胞單層屏障的轉(zhuǎn)運。(A)跨膜轉(zhuǎn)運實驗示意圖;(B)不同濃度SRL和SRL-NCs對Caco-2細胞活力的影響(n=6)。(C)SRL和SRL-NCs-Papp、A-B、Papp、B-A和Caco-2細胞單層的流出比(n=*6,*P<0.01)。(D)Caco-2細胞單層TEER值在整個轉(zhuǎn)運過程中的變化。數(shù)據(jù)表示為平均標準差。


數(shù)據(jù)測試

1.細胞屏障的特性

  cellZscope可以連續(xù)監(jiān)測細胞幾天甚至幾星期的生理狀態(tài)。從cellZscope所提供的跨膜電阻值(TEER)和電容值(Ccl)這兩個參數(shù)可以獲知當前的細胞狀態(tài),包括融合度和分化度。CaCO2是源自人類結腸癌細胞系,通常用于藥物轉(zhuǎn)運研究,圖中cellZscope跟蹤記錄了CaCO2細胞層的形成和分化的信息,自動化的記錄了從接種細胞開始并持續(xù)觀察21天。

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

長時間監(jiān)測細胞屏障的形成


2.緊密連接動力學

  上皮細胞和內(nèi)皮細胞的跨膜阻抗值與細胞間緊密連接密切相關。緊密連接可影響細胞間物質(zhì)轉(zhuǎn)運過程。通過cellZscope測量細胞層跨膜電阻可以用于研究緊密連接動力學。圖示MDCK細胞對不同濃度的EGTA的反應。

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope

細胞緊密動力學研究


3.新型藥物研發(fā)

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope


4.藥物或毒物對細胞屏障功能的影響

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5.腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移

實時無標記細胞動態(tài)分析儀-cellZscope


6.免疫細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用

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發(fā)表文章

2021

  1. Comparative sensitivity of proliferative and differentiated intestinal epithelial cells to the food contaminant, deoxynivalenol

  S. Luo, Ch. Terciolo, M. Neves, S. Puel, Cl. Naylies, Y. Lippi, Ph. Pinton, I.P. Oswald. Environ. Pollut. 277, 116818 (2021).

  → doi: 10.1016/j.envpol.2021.116818

  2. Human induced pluripotent stem cells (BIONi010-C) generate tight cell monolayers with blood-brain barrier traits and functional expression of large neutral amino acid transporter 1 (SLC7A5)

  C. Goldeman, M. Andersen, A. Al-Robai, T. Buchholtz, N. Svane, B. Ozgür, B. Holst, E. Shusta, V. Hall, L. Saaby, P. Hyttel, B. Brodin, Eur. J. Pharm. Sci. 156, 105577 (2021).

  → doi: 10.1016/j.ejps.2020.105577

  3. The effect of ultrasound cavitation on endothelial cells

  M.S. Karthikesh, X. Yang. Exp. Biol. Med. XX, YY (2021).

  → doi: 10.1177/1535370220982301

  4. Towards the development of a human in vitro model of the blood–brain barrier for virus-associated acute encephalopathy: assessment of the time- and concentration-dependent effects of TNF-a on paracellular tightness

  H. Maeda, K. Hashimoto, H. Go, K. Miyazaki, M. Sato, Y. Kawasaki, N. Momoi, M. Hosoya. Exp. Brain Res. 239, 451 (2021).

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  5. Generation and Characterization of Immortalized Mouse Cortical Astrocytes From Wildtype and Connexin43 Knockout Mice

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  A.Wünsch, D.Mulac, K.Langer. Int. J. Pharm. 593, 120146 (2021).

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  7. AMP-activated protein kinase is a key regulator of acute neurovascular permeability

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  → doi: 10.1242/jcs.253179

  8. Tight junctions in the blood–brain barrier promote edema formation and infarct size in stroke – Ambivalent effects of sealing proteins

  L. Winkler, R. Blasig, O. Breitkreuz-Korff, Ph. Berndt, S. Dithmer, H.C. Helms, D. Puchkov, K. Devraj, M. Kaya, Z. Qin, S. Liebner, H. Wolburg, A.V. Andjelkovic, A. Rex, I.E. Blasig, R.F. Haseloff, J. Cereb. Blood Flow Metab. 41, 132 (2021).

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  9. Meprin ?: A novel regulator of blood–brain barrier integrity

  M. Gindorf, S.E. Storck, A. Ohler, F. Scharfenberg, Ch. Becker-Pauly, C.U. Pietrzik, J. Cereb. Blood Flow Metab. 41, 31 (2021).

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  11. Development of an In Vitro Airway Epithelial–Endothelial Cell Culture Model on a Flexible Porous Poly(Trimethylene Carbonate) Membrane Based on Calu-3 Airway Epithelial Cells and Lung Microvascular Endothelial Cells

  T. Pasman, D. Baptista, S. van Riet, R.K. Truckenmüller, P.S. Hiemstra, R.J. Rottier, N.M. Hamelmann, J.M.J. Paulusse, D. Stamatialis, á.A. Poot Membranes 11, 197 (2021).

  → doi: 10.3390/membranes11030197

  12. Capabilities of selenoneine to cross the in vitro blood–brain barrier model

  E. Drobyshev, S. Raschke, R.A. Glabonjat, J. Bornhorst, F. Ebert, D. Kuehnelt, T. Schwerdtle. Metallomics 13, mfaa007 (2021).

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  13. TGF-?1 increases permeability of ciliated airway epithelia via redistribution of claudin 3 from tight junction into cell nuclei

  C. Schilpp, R. Lochbaum, P. Braubach, D. Jonigk, M. Frick, P. Dietl, O.H. Wittekindt. Pfluegers Arch. 473, 287 (2021).

  → doi: 10.1007/s00424-020-02501-2

  14. SZR-104, a Novel Kynurenic Acid Analogue with High Permeability through the Blood–Brain Barrier

  K. Molnár, B. Lorinczi, C. Fazakas, I. Szatmári, F. Fül?p, N. Kmetykó, R. Berkecz, I. Ilisz, I.A. Krizbai, I. Wilhelm,L. Vécsei. Pharmaceutics 13, 61 (2021).

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  15. Endothelial Iron Homeostasis Regulates Blood-Brain Barrier Integrity via the HIF2a—Ve-Cadherin Pathway

  D. Rand, O. Ravid, D. Atrakchi, H. Israelov, Y. Bresler, Ch. Shemesh, L. Omesi, S. Liraz-Zaltsman, F. Gosselet, T.S. Maskrey, M. Schnaider Beeri, P. Wipf, I. Cooper Pharmaceutics 13, 311 (2021).

  → doi: 10.3390/pharmaceutics13030311

  16. Astrocyte-derived Wnt growth factors are required for endothelial blood-brain barrier maintenance

  S. Guerit, E. Fidan, J. Macas, C.J. CCzupalla, R. Figueiredo, A. Vijikumar, B.H. Yalcin, S. Thom, P. Winter, H. Gerhardt, K. Devraj, S. Liebner. Prog. Neurobiol. 199, 101937 (2021).

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  17. Role of the C5a-C5a receptor axis in the inflammatory responses of the lungs after experimental polytrauma and hemorrhagic shock

  S. Chakraborty, V.E. Winkelmann, S. Braumüller, A. Palmer, A. Schultze, B. Klohs, A. Ignatius, A. Vater, M. Fauler, M. Frick, M. Huber-Lang. Sci. Rep. 11, 2158 (2021).

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  18. Pharmacological targeting of host chaperones protects from pertussis toxin in vitro and in vivo

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  19. Repeated exposure of Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX intestinal cell models to (nano)silver in vitro: Comparison of two commercially available colloidal silver products

  20. K. Gillois, Ch. Stoffels, M. Leveque, I. Fourquaux, J. Blesson, V. Mils, S. Cambier, J. Vignard, H. Terrisse, G. Mirey, J.-N. Audinot, V. Theodorou, M.-H. Ropers, H. Robert, M. Mercier-Bonin. Sci. Total Environ. 754, 14232 (2021).

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  21. Microfluidic In Vitro Platform for (Nano)Safety and (Nano)Drug Efficiency Screening

  Y. Kohl, M. Biehl, S. Spring, M. Hesler, V. Ogourtsov, M. Todorovic, J. Owen, E. Elje, K. Kopecka, O.H. Moriones, N.G. Bastús, P. Simon, T. Dubaj, E. Rundén-Pran, V. Puntes, N. William, H. von Briesen, S. Wagner, N. Kapur, E. Mariussen, A. Nelson, A. Gabelova, M. Dusinska, Th. Velten, Th. Knoll. Small XX, YY (2021).

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  Retinoic acid signalling adjusts tight junction permeability in response to air-liquid interface conditions

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  Synthesis and in vitro evaluation of cyclodextrin hyaluronic acid conjugates as a new candidate for intestinal drug carrier for steroid hormones

  M. Heslera, D.H.Schwarz, S. D?hnhardt-Pfeiffer, S. Wagner, H. von Briesen, G. Wenz, Y. Kohl

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  Serine proteases as luminal mediators of intestinal barrier dysfunction and symptom severity in IBS

  S. Edogawa, A. Ledwinson, S.A. Peters, L.L. Chikkamenahalli, W. Sundt, S. Graves, S.V. Gurunathan, M. Breen-Lyles, S. Johnson, R. Dyer, R. Graham, J. Chen, P. Kashyap, G. Farrugia, M. Grover

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  TGR5-dependent hepatoprotection through the regulation of biliary epithelium barrier function

  G. Merlen, N. Kahale, J. Ursic-Bedoya, V. Bidault-Jourdainne, H. Simerabet, I. Doignon, Z. Tanfin, I. Garcin, N. Péan, J. Gautherot, A. Davit-Spraul, C. Guettier, L. Humbert, D. Rainteau, K. Ebnet, Ch. Ullmer, D. Cassio, T. Tordjmann

  Gut 69, 146 (2020).→ doi: 10.1136/gutjnl-2018-31697

  Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) Recruitment of PAR Polarity Protein Atypical PKC? to Pedestals and Cell–Cell Contacts Precedes Disruption of Tight Junctions in Intestinal Epithelial Cells

  R. Tapia, S.E. Kralicek, G.A. Hecht

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  Meprin ?: A novel regulator of blood–brain barrier integrity

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  Identification of Parthenolide Dimers as Activators of Pyruvate Kinase M2 in Xenografts of Glioblastoma Multiforme in Vivo

  Y. Ding, Q. Xue, S. Liu, K. Hu, D. Wang, T. Wang, Y. Li, H. Guo, X. Hao, W. Ge, Y. Zhang, A. Li J. Li, Y. Chen, Q. Zhang

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  Monophosphoryl Lipid a Attenuates Multiorgan Dysfunction During Post-Burn Pseudomonas Aeruginosa Pneumonia in Sheep

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