摘要：本發(fā)明公開了一種將目的DNA片段插入載體中的方法，包括以下步驟：1)設(shè)計(jì)并合成擴(kuò)增目的DNA片斷的引物，該引物的最外側(cè)有3～20個(gè)堿基與線性載體最外側(cè)完全互補(bǔ)，用該引物擴(kuò)增得到目的DNA片段；2)將目的DNA片段和線性載體混合，加入同時(shí)具有3’端至5’端外切酶活性和同源重組酶活性的重組酶進(jìn)行反應(yīng)，得到插入了目的DNA片段的重組載體。本發(fā)明具有外切與同源重組的雙重功效，在較大范圍內(nèi)(即3～20個(gè)堿基)選擇PCR產(chǎn)物與線性載體的同源堿基數(shù)量，使重組末端堿基數(shù)目的選擇更加靈活；無(wú)需DNA連接酶，只要把目標(biāo)載體線性化，PCR產(chǎn)物無(wú)需任何酶促處理，直接和目標(biāo)載體混合，20分鐘一站式解決所有問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)完美的無(wú)縫連接，操作簡(jiǎn)單，成本較低。
- 專利類型發(fā)明專利
- 申請(qǐng)人上海捷瑞生物工程有限公司;
- 發(fā)明人肖愛軍;邵標(biāo);赫英俊;
- 地址200233 上海市宜山路822號(hào)508室
- 申請(qǐng)?zhí)?/b>CN200910051959.7
- 申請(qǐng)時(shí)間2009年05月26日
- 申請(qǐng)公布號(hào)CN101899467A
- 申請(qǐng)公布時(shí)間2010年12月01日
- 分類號(hào)C12N15/66(2006.01)I;
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