色譜分析法是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)及生化工程領(lǐng)域的分離方法，高度選擇性的工藝可以分離出物理化學(xué)性質(zhì)極為相似的成分，這在工藝過程及過程分析中很重要
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
理解液相色譜法的原理及練習(xí)，包括如下內(nèi)容：
理解影響分離的因素
理解通過紫外分光光度法測(cè)量蛋白質(zhì)濃度的方法
詳細(xì)的教學(xué)練習(xí)包括向?qū)W生演示大小排除(凝膠過濾)色譜法的重要方面。提供的信息包括合適的凝膠基質(zhì)、緩沖液、蛋白質(zhì)等細(xì)節(jié)和深入的實(shí)驗(yàn)方案。
雖然實(shí)驗(yàn)僅涉及尺寸排斥色譜法，但該系統(tǒng)適用于離子交換、親和作用和疏水作用等其他低壓液相色譜系統(tǒng)。
該系統(tǒng)包括一個(gè)用于在線測(cè)量蛋白質(zhì)濃度的紫外流動(dòng)單元。檢測(cè)水平為0.1 mg/ml的蛋白(牛血清白蛋白)。
確定流速和色譜柱長(zhǎng)度對(duì)產(chǎn)品分離和濃縮的影響
描述
BE2由一個(gè)臺(tái)式裝置組成，在其上安裝兩個(gè)長(zhǎng)250毫米、直徑10毫米的硼硅酸鹽玻璃色譜柱。兩者都配有可調(diào)的端部件，以允許不同的床高進(jìn)行調(diào)查。在每個(gè)柱的頂部都有隔膜注射器，允許將樣品引入柱表面。該柱是由一個(gè)3通道蠕動(dòng)泵8輥設(shè)計(jì)，以提供平穩(wěn)的流量。該泵具有變速驅(qū)動(dòng)和廣泛的管孔可以使用，從而提供一個(gè)非常廣泛的流量范圍。
開關(guān)閥允許操作者輕松地選擇所需的操作列。在塔的入口之前安裝一個(gè)氣泡捕集器，以防止空氣進(jìn)入。從該柱的出口通過到紫外光學(xué)流動(dòng)單元，用于在線測(cè)量樣品洗脫。流出流動(dòng)單元的液體既可以引導(dǎo)流出，也可以使用成分收集器收集。成分收集器是定時(shí)器控制的，它可以容納48根3毫升的試管。
為了保護(hù)色譜柱，必須對(duì)所有引入色譜柱的緩沖液和樣品進(jìn)行過濾和脫氣。所需設(shè)備為標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，但如果需要，也可以選擇BE2 -1。BE2-1由濾膜架、保溫瓶、真空泵和濾膜組成。樣品過濾系統(tǒng)由注射器和一次性膜過濾器組成。樣品注射器和針頭也包括在內(nèi)。
液相色譜所需要的方法確實(shí)需要一些實(shí)踐，以達(dá)到可重復(fù)的結(jié)果。因此，對(duì)于沒有這方面經(jīng)驗(yàn)的用戶，建議提供培訓(xùn)。
BE2系統(tǒng)是一種工業(yè)上非常重要的色譜法，即低壓液相色譜法，其中包括離子交換法、尺寸排斥法、疏水相互作用法和親和層析法。每種類型都使用不同的分離方法，分別是:粒子電荷、粒子大小和形狀、分子疏水性和生物特異性。BE2包括詳細(xì)的尺寸排斥色譜實(shí)驗(yàn)程序，特別是在分離蛋白質(zhì)和染料方面。同時(shí)也可以用于研究其他類型的低壓液相色譜。
尺寸排斥色譜法使用多孔球體來分離不同尺寸的顆粒，球體上小孔的粒徑范圍決定了顆粒是全部排阻還是部分排阻或是完全進(jìn)入球體，完全排阻的顆粒在色譜柱體中的停留時(shí)間短，完全進(jìn)入球體中的顆粒在柱體中停留時(shí)間長(zhǎng)。部分排阻的顆粒停留時(shí)間介入二者之間。通過這種方法，不同粒徑的顆粒即被分離。
