一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑
1、實(shí)驗(yàn)器材
名稱(chēng)廠(chǎng)家型號(hào)
臨界點(diǎn)干燥儀QuorumK850
離子濺射儀IXRFMSP-2S
掃描電子顯微鏡hitachiSU8010
2、主要實(shí)驗(yàn)試劑
試劑廠(chǎng)家貨號(hào)
電鏡固定液ServicebioG1102
無(wú)水乙醇國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司
PBSServicebioG0002
鋨酸Ted Pella Inc
二、掃描電鏡制樣步驟
1、取材固定：新鮮組織確定取材部位，盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機(jī)械損傷，1-3min內(nèi)取樣，組織塊不超過(guò)3mm2，用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污，毛發(fā)等去掉，保護(hù)好需要掃描的面并做好標(biāo)記（如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理）。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存。
貼壁細(xì)胞：貼壁于蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)處理完成后棄培養(yǎng)基，用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存。注意保護(hù)好掃描面避免劇烈震蕩細(xì)胞脫落。
2、后固定：固定好的樣品經(jīng)0.1M磷酸緩沖液PB（（PH7.4）漂洗3次，每次15min。1%的鋨酸·0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）室溫（20℃）固定1-2h。0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。
3、脫水：組織依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%--酒精每次15min。
4、干燥：將樣本放入臨界點(diǎn)干燥儀內(nèi)進(jìn)行干燥。
（無(wú)機(jī)材料不需要以上步驟）
5、樣本導(dǎo)電處理：將樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺(tái)上進(jìn)行噴金30s左右。
6、掃描電子顯微鏡下觀(guān)察采圖。
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