常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性。固定劑可分為兩類：有機(jī)溶劑和交聯(lián)劑。

　　有機(jī)溶劑：如乙醇和丙酮能夠去處脂 類物質(zhì)使細(xì)胞脫水，把蛋白質(zhì)沉淀在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上。

　　交聯(lián)劑：如多聚甲醛一般通過自由氨基基團(tuán)把生物分子橋連起來，形成一個(gè)相互交聯(lián)的抗原網(wǎng)。許多人發(fā)現(xiàn)用交聯(lián)劑固定細(xì)胞效果較好，尤其是做免疫熒光的時(shí)候，當(dāng)然沒有固定的規(guī)則可言。不過，單獨(dú)用多聚甲醛固定的細(xì)胞不能使抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此，標(biāo)本固定后必須用非離子去污劑透化標(biāo)本。

　　方法一

　　1) 900 ml dd H20 500 ul 1N NaOH

　　2) Heat to 65-70℃

　　3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde

　　4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved

　　5) Let cool to room temperature

　　6) Add 100 ml of 10X PBS

　　7) pH to 7.3 with HCl

　　8) Sterile with filter

　　9) Store at 4℃, protected from light

　　方法二

　　1)稱取40gPFA(多聚甲醛)溶于裝有500mlDEPC水的玻璃容器(燒杯或燒瓶)中，持續(xù)加熱。上海創(chuàng)賽科技提供多聚甲醛，Paraformaldehyde，商品編號(hào)：B11000407-25g，價(jià)格41.3元。

　　2)磁力攪拌至60-65℃，大約1-2小時(shí)可以溶解，使成乳白色懸液。上海創(chuàng)賽科技提供E22-MYP11-2A型智能恒溫磁力攪拌器，商品編號(hào)：E22-MYP11-2A，詢價(jià)。

　　3)用1.0mmol/L 的NaOH調(diào)PH至7.0使呈清亮狀(滴加)，再加入約500ml 2×PBS，充分混勻(在冰浴或冷水浴中)。上海創(chuàng)賽科技提供PBS緩沖液，商品編號(hào)：D16-1027378-2ml，價(jià)格23元。

　　4)檢測(cè)PH，過濾后定容至1000ml，室溫或4℃(保存?zhèn)溆?，使用前新鮮配制。

　　注意：

　　1.配制時(shí)應(yīng)在通風(fēng)條件下操作，并避免接觸皮膚及吸入(戴口罩及手套)，因PFA有較強(qiáng)的毒性，對(duì)粘膜及皮膚有刺激作用。

　　2.加熱時(shí)，溫度不可過 高，常為60-65℃。否則PFA降解失效，配制好的PFA雖可有效一點(diǎn)時(shí)間，但過久的液體，固定效果下降，應(yīng)用前新鮮配制。

　　除了用DEPC水配制PFA外，也可以用滅菌蒸餾水或經(jīng)DEPC處理的0.01-0.1%/L的PBS配制，方法及主要事項(xiàng)同上。上海創(chuàng)賽科技提供焦碳酸二乙酯，DEPC (Diethylpyrocarbonate)，1609-47-8，商品編號(hào)：B11000132-5ml，價(jià)格64.5元。

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