組織培養(yǎng)(Tissue culture)是在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境,在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下。使從體內(nèi)取出的組織生存、生長繁殖和傳代,并維持原有的結(jié)構(gòu)和功能特性。廣義的組織培養(yǎng)與體外培養(yǎng)同義。體外培養(yǎng)(Invitro)包括所有結(jié)構(gòu)層次的培養(yǎng),即:組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。
所謂細(xì)胞培養(yǎng)(Cell culture)是指細(xì)胞包括單個細(xì)胞在體外條件的生長。 組織培養(yǎng)的發(fā)展史已有近百年,最初的組織培養(yǎng)是胚胎學(xué)和微生物學(xué)的引申,建立于無菌原則上,用天然體液(如胎汁、血漿)來維持從整體切下的組織塊,對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)和功能的觀察。
組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺的廣泛使用,很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作,并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。上海創(chuàng)賽提供:60x15mm細(xì)菌培養(yǎng)皿,帶蓋,三出口,商品編號:R01-66-1560-60x15mm?,價格374元。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
無菌操作區(qū)
(1)無菌操作室:
無菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。
理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境,同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c) 無菌操作間—―專用于無菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。上海創(chuàng)賽提供:9.0CM一次性細(xì)胞培養(yǎng)皿,平底滅菌,適合細(xì)胞貼壁生長,商品編號:C81-TCD010090-10個/包,價格16.8元。
工作臺安置不應(yīng)靠墻壁,臺面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
無菌操作間的空氣消毒:紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。
空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-最好。
潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級別表潔凈度級別:
塵粒最大允許數(shù)/立方米 100級 3,500 0 5 110000級
微生物最大允許數(shù) 350,000 2,000 100 3100000級
浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 500 10300000級
沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15
無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的,消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。
(2)凈化工作臺:
操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。
一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種:
a)側(cè)流式或稱垂直式
b)外流式或稱水平層流式。
凈化工作臺工作原理(大致相同)—-通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū),從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。
側(cè)流式工作臺—-空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過工作臺面流向?qū)?cè),也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌。工作臺結(jié)構(gòu)為封閉式。外流式(水平式)工作臺—-凈化后的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對操作者不利。工作臺結(jié)構(gòu)為開放式(已少用)。
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