本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷植物抗壞血酸過氧化物酶（APX）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被植物抗壞血酸過氧化物酶（APX）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物抗壞血酸過氧化物酶（APX）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備注微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無標(biāo)準(zhǔn)品（6管） 0.5ml/管 0.5mL/管 無樣本稀釋液 6mL 3mL 無檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋底物A 6mL 3mL 無底物B 6mL 3mL 無終止液 6mL 3mL 無封板膜 2張 2張 無說明書 1份 1份 無自封袋 1個(gè) 1個(gè) 無注：1、標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：2000、1000、500、250、125、62.5 pg/mL.2、在樣本值超過標(biāo)準(zhǔn)品最高濃度的情況下，可用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋樣本。試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3. 待測樣本孔各加待測樣本50μL；4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 所有孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：最低檢測濃度小于10 pg/mL。3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。